Вести

Javascript е моментално оневозможен во вашиот прелистувач.Некои функции на оваа веб-локација нема да работат ако JavaScript е оневозможен.
Регистрирајте се со вашите специфични податоци и конкретниот лек од интерес, и ние ќе ги усогласиме информациите што ги давате со написите во нашата обемна база на податоци и веднаш ќе ви испратиме е-пошта во PDF копија.
Динг Џингнуо, Жао Веифенг, Оддел за заразни болести, Првата поврзана болница на Универзитетот во Сужоу, Сити Сужоу, провинција Џиангсу, 215000 Тел.тумори на дигестивниот систем со вкупно 5-годишно преживување од 14,1%.Многу пациенти со HCC се дијагностицираат во напредна фаза, така што раниот скрининг е од суштинско значење за да се намали смртноста од HCC.Покрај вообичаено користените индикатори за откривање, како што се серумски алфа-фетопротеин (AFP), лектин-реактивен алфа-фетопротеин (AFP-L3) и абнормален протромбин (протеин II, PIVKA-II предизвикан од недостаток на витамин К), техники на течна биопсија Се покажа дека има дијагностичка вредност при откривање на HCC.Во споредба со инвазивните процедури, течната биопсија може да открие циркулирачки малигни метаболити.Техниките на течна биопсија откриваат циркулирачки туморски клетки, циркулирачка туморска ДНК, циркулирачка РНК и егзозоми и се користат за ран скрининг, дијагноза и прогностичка евалуација на HCC.Оваа статија ја разгледува молекуларната биологија и примената на различни техники за биопсија на течност за да се изолираат ветувачки биомаркери кои можат да бидат остварливи опции за рана проценка на HCC за да се подобри раниот скрининг на високоризичните HCC групи.Клучни зборови: техника на биопсија на течност, хепатоцелуларен карцином, високоризична група.
Хепатоцелуларниот карцином (HCC) е чест малигнен тумор на дигестивниот тракт, рангиран на шестото место меѓу новите случаи на малигни тумори и кај мажите и кај жените.1 Во светот, ракот на црниот дроб е трета водечка причина за смрт од рак по ракот на белите дробови и колоректалниот карцином, со 8,3% од смртните случаи поврзани со рак од сите малигни неоплазми.1 Прогнозата на HCC е тесно поврзана со фазата на дијагноза.Главните причини за слабото преживување кај HCC се интрахепатичните метастази, тромбите на порталниот венски тумор и далечните метастази кои ја исклучуваат ресекцијата, а многу од овие карактеристики се веќе присутни кај пациентите во моментот на дијагнозата.
Врз основа на упатствата за дијагностика и третман, главните фактори на ризик за развој на HCC се цироза на црниот дроб, хроничен вирус на хепатитис Б (HBV) или инфекција со вирусот на хепатитис Ц (HCV), алкохолна масна болест на црниот дроб и безалкохолна масна болест на црниот дроб (NAFLD). ).2 Дополнително, факторите на ризик за HCC вклучуваат внес на храна контаминирана со афлатоксин, шистозомијаза, други причини за цироза, семејна историја на рак на црниот дроб, дијабетес, дебелина, пушење и повреда на црниот дроб предизвикана од лекови.Високо ризичните групи од 35 и 45 години треба да имаат редовни медицински прегледи.Раниот скрининг е важна стратегија за ран третман за да се подобри целокупното преживување на пациентите со HCC.
Биомаркерите како AFP, AFP-L3 и PIVKA-II се препорачуваат за ран скрининг на HCC3,4.Техниките на течна биопсија покажаа ветувачки резултати во раната дијагноза и евалуација на третманот.5,6 Постигнат е значителен напредок во HCC течната биопсија, која може да има поголема чувствителност и специфичност од вообичаено користените серумски маркери како што е AFP (Табела 1).
AFP е широко користен биомаркер во HCC и моментално е најдетален биомаркер кој широко се користи за ран скрининг, дијагноза и евалуација на болеста.Постојаното покачено ниво на AFP се смета за фактор на ризик за прогресијата на HCC.7,8 Стапката на откривање на малиот хепатоцелуларен карцином (sHCC) се зголемува со развојот на ултразвук и компјутерска томографија, а AFP е откриено дека е особено нечувствителна на откривање на hHCC во клиничката пракса.Според ретроспективна мултицентрична студија9, AFP позитивен е пронајден во 46% (616/1338) од случаите на HCC и 23,4% (150/641) од случаите на sHCC.Покрај тоа, нивоата на AFP се покачени кај пациенти со хронично заболување на црниот дроб и цироза.10 Така, AFP има ограничен скрининг ефект за sHCC.11 Според Азиско-пацифичките упатства за клиничка пракса за хепатоцелуларен карцином, употребата на AFP не се препорачува.12 Клиничките докази сугерираат дека PIVKA-II е супериорен во однос на AFP во третманот на HCC и дека комбинацијата на PIVKA-II и AFP има повисока дијагностичка вредност кај HCC.13 Во споредба со ткивната биопсија, течната биопсија првенствено открива метаболити поврзани со туморот во телесните течности (крв, плунка, плеврална течност, цереброспинална течност или урина) и е помалку инвазивна за ткивата.14 Дополнително, течните биопсии може да рефлектираат малигни карактеристики кои не се присутни во примарното туморско ткиво.15 Течните биопсии сè уште не се тестираат во клиничката пракса за сите видови тумори, но нивниот дијагностички потенцијал кај ракот го привлекува вниманието на онколозите.16 Течната биопсија може да открие циркулирачки туморски клетки (CTCs), циркулирачка туморска ДНК (cDNA), циркулирачка слободна РНК (ecRNA) и егзозоми.Во оваа статија, ќе разговараме за карактеристиките, улогата и примената на различни техники на биопсија на течност во раниот скрининг на високоризичните HCC групи.
Екстрацелуларната ДНК (cfDNA) во примероците на крв од здрави индивидуи првпат беше опишана во 1948 година од Мандел и сор.17 cfDNA е ДНК фрагмент без клетки со должина приближно 160-180 bp, кој првенствено потекнува од лимфоцити и миелоидни клетки.ctDNA е специфичен мутант на ДНК фрагмент ослободен од клетките на туморот во периферната крв, што ги претставува геномските информации на клетките на туморот по одредени патофизиолошки процеси, вклучувајќи некроза, апоптоза и екскреција.Пропорцијата на ctDNA во вкупната cfDNA варира во голема мера зависно од типот на туморот, а фрагментите на cDNA се пријавени дека обично се помали од 167 bp во должина.18 Студијата на Underhill покажа дека фрагментите на cfDNA генерално се пократки од нормалната cfDNA.19 Во споредба со здравите индивидуи, вкупната должина на фрагментите на cfDNA во крвта на пациентите со рак е пократка, така што cfDNA може да се користи како индикатор за ран скрининг на туморот.Збогатувањето на одредени подмножества на должини на фрагментите на cfDNA може да го подобри откривањето на cDNA поврзано со неметастатски цврсти тумори.Студиите покажаа дека ctDNA се наоѓа во над 75% од напредните карциноми на панкреасот, дебелото црево, мочниот меур, гастроинтестиналниот тракт, црниот дроб, јајниците, дојката, меланом и ракот на главата и вратот.20,21 Сепак, количината на ctDNA во крвта зависи од локацијата на туморот.22 Во една студија на Бетегауд, пациентите со колоректален карцином, дојка, црн дроб, бели дробови и рак на простата, беше откриено дека имаат повисоки нивоа на cDNA во крвта од другите видови на рак.Спротивно на тоа, кај пациенти со орален карцином, рак на панкреас, рак на желудник и глиома, концентрацијата на cDNA во крвта била помала.Дваесет и еден
Бидејќи ctDNA ги содржи истите генетски мутации како примарните туморски клетки, cDNA може да се користи за откривање на хетерогени туморски специфични мутации и епигенетски промени, вклучувајќи метилација, хидроксиметилација, варијации на единечни нуклеотиди и варијации на бројот на копии.Дваесет и три
Метилацијата на ДНК е една од најчестите епигенетски промени што резултираат со генска репресија.Во споредба со нормалните клетки, постојат разлики во целокупното ниво на метилација на геномот на клетките на туморот, особено во метилацијата на туморските супресорни гени, што може да се открие во рана фаза, што укажува дека промените во метилацијата на ДНК може да бидат показател за рана откривање на туморигенеза.Туморските супресорни гени поврзани со HCC може да се деактивираат со промоторна метилација, со што се стимулира туморигенезата.24 Метилацијата на ДНК е идеален маркер за рана дијагноза на тумори поради неговата ткивна специфичност, детектибилност и независност од возраста.Дополнително, метилацијата на ДНК е почеста во споредба со соматските мутации бидејќи има повеќе целни региони и неколку изменети CpG места во секој регион од целниот геном.25 Покрај повеќе CpG места, голем број независни хиперметилирани локуси во ctDNA се идентификувани во DBX2, THY1, MT1M, INK4A, VIM, FBLN1 и RGS10.26 Xu et al.Утврдено е дека споредувањето на примероците на cfDNA од 1098 пациенти со HCC и 835 здрави контроли биле гените поврзани со HCC дека се во силна корелација со соодветните потписи за метилација на cDNA во плазмата.25 Врз основа на лабораториска анализа, развиен е предиктивен модел кој содржи 10 маркери за метилација со чувствителност и специфичност од 85,7% и 94,3%, соодветно, и овие маркери беа во голема корелација со масата на туморот, фазата на туморот и одговорот на третманот.Овие резултати покажуваат дека употребата на маркери за метилација на cDNA има големо ветување во дијагнозата, следењето и прогнозата на HCC.Во моделот на метилација кој се состои од три несоодветно метилирани гени (APC, COX2, RASSF1A) и една miRNA (miR203) претставена од Lu et al27, чувствителноста и специфичноста на моделот 27 за дијагностицирање на HCC поврзан со HBV беа споредливи.80%.Дополнително, моделот може да открие 75% од недијагностицирани HCC пациенти со ниво на AFP од 20 ng/mL.Генот за протеинот 1A од фамилијата на доменот поврзан со Ras (RASSF1A) е главната повторлива ДНК секвенца во човечкиот геном.Араујо и сор.заклучи дека хиперметилацијата на промоторот RASSF1A може да биде вреден биомаркер за ран скрининг на HCC и потенцијална молекуларна цел за епигенетска терапија.28 Во една студија, серумската хиперметилација на промоторот RASSF1A беше пронајдена кај 73,3% од пациентите со HCC.29 Долго прошаран нуклеотиден елемент 1 (ЛИНИЈА-1) е уште еден високо активен посредник за ретротранспозиција.Хипометилацијата на LINE-1 беше пронајдена во ДНК на 66,7% од примероците од HCC серум и беше поврзана со рано повторување и слабо преживување по радикална ресекција.29 Хиперметилацијата е вообичаен генетски процес кој игра единствена улога во развојот на цироза на црниот дроб и HCC.30 Спротивно на тоа, хидроксиметилацијата е процес на деметилација кој индуцира генска реактивација и експресија, а откривањето на производот 5-хидроксиметилцитозин (5-hmC) во овој процес може да се користи за да се идентификува тумор.Метилацијата и хидроксиметилацијата на cDNA се поврзани со туморигенезата и може да придонесат за раниот скрининг на HCC.Во една студија на 2554 субјекти, 31 5-hmC на геномот беа пронајдени во примероците на cfDNA и 32 гени беа идентификувани со споредување на 5-hmC секвенци кај пациенти со HCC и групи со висок ризик, како што се оние со хронични заболувања.Дијагностички модели на заболувања на црниот дроб.и цироза.Овој модел беше супериорен во однос на AFP во разликувањето на HCC од нетуморското ткиво.
Мутациите во кодирачките региони може да доведат до транскрипциски абнормалности, што може да доведе до промени во протеинските секвенци и на крајот до рак.Варијантите на единечни нуклеотиди се важни геномски маркери за раниот скрининг на туморот поради нивната висока ткивна доверливост и високата специфичност на туморот и ткивото.Бројни студии поврзани со HCC кои користат секвенционирање на следната генерација (NGS) за секвенционирање на егзомот и целиот геном на ракот, идентификуваа заеднички мутирани клеточни гени како TP53 и CTNNB1, како и неколку вклучувајќи ARID1A, MLL, IRF2.Новите гени, ATM, CDKN2A, FGF19, PIK3CA, RPS6KA3 и JAK1 покажуваат умерени стапки на мутација. Анализата на функцијата на мутантниот ген сугерира дека промените во ремоделирањето на хроматинот, трансдукцијата на сигналот Wnt/β-катенин и JAK/STAT, патеката на циклусот на клетките P53, епигенетските модификатори, патиштата на оксидативниот стрес, патеката PI3K/AKT/MTOR и RAS/RAF/ Патеката на MAPK киназата игра клучна улога во онкогенезата на HCC.32,33 Во една студија во која беа откриени мутации поврзани со туморот, Хуанг и сор открија дека фреквенцијата на мутациите поврзани со туморот зависни од ctDNA беше 19,5%, а специфичноста беше 90% .34 Дополнително, пациентите кои доживеале васкуларна инвазија имале поголема веројатност да имаат мутации на ctDNA (P=0,041) и пократко преживување без повторување (P<0,001). Анализата на функцијата на мутантниот ген сугерира дека промените во ремоделирањето на хроматинот, трансдукцијата на сигналот Wnt/β-катенин и JAK/STAT, патеката на циклусот на клетките P53, епигенетските модификатори, патиштата на оксидативниот стрес, патеката PI3K/AKT/MTOR и RAS/RAF/ Патеката на MAPK киназата игра клучна улога во онкогенезата на HCC.32,33 Во една студија во која беа откриени мутации поврзани со туморот, Хуанг и сор открија дека фреквенцијата на мутациите поврзани со туморот зависни од ctDNA беше 19,5%, а специфичноста беше 90% .34 Дополнително, пациентите кои доживеале васкуларна инвазија имале поголема веројатност да имаат мутации на ctDNA (P=0,041) и пократко преживување без повторување (P<0,001).Анализата на функцијата на мутантниот ген сугерира дека промените во ремоделирањето на хроматин, Wnt/β-катенин и JAK/STAT сигнализација, патеката на клеточниот циклус P53, епигенетските модификатори, патиштата на оксидативниот стрес, патеката PI3K/AKT/MTOR и RAS/RAF/MAPK киназата критична улога во туморигенезата на HCC.32,33 Во една студија која откри мутации поврзани со туморот, Huang et al.покажа дека фреквенцијата на ctDNA-зависни мутации поврзани со туморот е 19,5%, а специфичноста е 90%..34 Кроме того, у пациентов со сосудистой инвазие чаще встречались мутации цДНК (P=0,041) и более короткая безрецидивная выживаемость (P<0,001). .34 Дополнително, пациентите со васкуларна инвазија имале повеќе мутации на cDNA (P=0,041) и пократко преживување без болест (P<0,001).Функционалната анализа на мутантните гени откри ремоделирање на хроматин, Wnt/β-катенин и JAK/STAT сигнализација, патека на клеточниот циклус P53, епигенетски модификатори, патека на оксидативен стрес, патека PI3K/AKT/MTOR и RAS/RAF/MAPK патеката на киназата игра клучна улога во онкогенезата на HCC. 32,33 在 一 项 检测 到 肿瘤 相关 突变 的 中 ， ， huang 等 人 发现 相关 突变 依赖于 ctdna 的 频率 为 为 19,5% ， 特异性 为 90% .34 此外 ， ， 经历 经历 侵犯 的 患者 更 有 可能 可能 ctdna突变（P=0,041）和更短的无复发生存期（P<0,001）。 На短的无复发生存期（P<0,001）.32,33 Во една студија која откри мутации поврзани со туморот, Хуанг и сор.откриле дека мутациите поврзани со туморот се 19,5% зависни од cDNA со специфичност од 90% 34. Покрај тоа, пациентите кои биле подложени на васкуларна инвазија имале поголема веројатност да развијат cDNA.мутация (P = 0,041) и более короткая безрецидивная выживаемость (P <0,001). мутација (P=0.041) и пократко преживување без болест (P<0.001).Друг вообичаен ген за двигател на HCC е TP53, кој има стапка на мутација од над 30%.Истражувањата покажаа дека фреквенцијата на TP53 мутации во ctDNA во крвта и урината се движи од 5% до 60%.35 Студијата на Јохан покажа дека спектарот на мутации на ctDNA во доцниот HCC има слична стапка на мутација со раниот HCC, вклучувајќи го TERT промоторот (51%), TP53 (32%), CTNNB1 (17%), PTEN (8%), мутации во AXIN1 ., ARID2, KMT2D и TSC2 (по 6%).36 Онкогенот β-катенин (CTNNB1) игра важна улога во сигналниот пат Wnt.Транскрипцискиот коактиватор CTNNB1 може да промовира генска експресија, што може да доведе до клеточна пролиферација, инхибиција на апоптозата и ангиогенеза.CTNNB1, исто така, може да комуницира со TERT за да предизвика трансформација на хепатоцитите.33 ТЕРТ-промоторот често се мутира кај некои цврсти тумори.Промените во TERT, една од најраните генетски промени во малигната трансформација на HCC, може да доведат до реактивирање на теломеразата во цирозните хепатоцити и може да промовираат пролиферација и да го спречат стареењето.Пријавено е дека мутациите во 33-37 TERT промоторот се јавуваат кај 59-90% од пациентите со пролиферативни јазли на црниот дроб и ран HCC и се поврзани со преживување.38
Промените на бројот на копии (CNA) се важен подтип на соматски мутации.Истражувањата покажаа дека широко распространето и фокално оптоварување на CNA е геномски потпис способен да предвиди имунолошка инфилтрација и исклучување на туморот кај некои видови рак.39 Активна сигнализација за инфилтрација, висока цитолитичка активност, тешко воспаление и генетски маркери поврзани со презентација на антиген во HCC.Анализата на низата на податоци на полиморфизми на единечни нуклеотиди кај 477 субјекти откри мало оптоварување на ЦНС.Спротивно на тоа, хромозомски нестабилните тумори со високо екстензивно оптоварување на CNA покажаа знаци на имуно отфрлање и беа поврзани со пролиферација, поправка на ДНК и дисфункција на TP53.Ксу и сор.покажа дека групата HCC имала повисоки резултати на CNA од групата со хронични заболувања на црниот дроб.40 Користејќи секвенционирање на целиот геном на една клетка, беше откриено дека CNA се појавуваат рано во хепатокарциногенезата и остануваат релативно стабилни за време на прогресијата на туморот.41 Чунг и сор.покажа дека нивоата на cfDNA се значително покачени кај пациенти со HCC и дека CNA ширум геномот во cfDNA се важен независен прогностички маркер кај пациенти со HCC третирани со сорафениб.42.Олерих и сор.откриле дека индексот на нестабилност на бројот на копии (CNI) може да се користи за проценка на CNA во cfDNA кај пациенти со рак.Тие забележаа дека пациентите со напреднат карцином имале значително повисоки резултати на CNI од контролната група, која го проценува одговорот на пациентот на системска хемотерапија и имунотерапија.43 Овие резултати сугерираат дека CNA пронајдени во примероци од течна биопсија може да послужат како прогностички индикатори кај пациенти со напреднат карцином.HCC на позадината на системската терапија.
Во моментов, методите што се користат за откривање на ctDNA може да се поделат на насочени и нетаргетирани методи.Накратко, насочените методи како дигитална полимеразна верижна реакција (dPCR), BEAMing digital PCR, Amplification Refractory Mutation System-PCR, Capp-Seq и Tam-Seq се високо чувствителни на однапред дефинирани гени.Методите надвор од целта, како што се секвенционирање на целиот геном и NGS обезбедуваат сеопфатен преглед на целиот геномски пејзаж.44 Во споредба со целните панели, секвенционирањето на целиот геном може да открие не само мутации и вметнувања на точки, туку и преуредувања и варијации на бројот на копии.прогноза, а CTC и cfDNA се добри показатели кои можат да се користат за динамично следење на HCC.45 Дополнително, cfDNA анализата може да биде покорисна во откривањето на HCC.Јан и сор.покажа дека cfDNA во плазмата на пациенти со HCC е значително повисока отколку кај пациенти со фиброза на црниот дроб и здрави контроли.Во споредба со АФП, ctDNA се очекува да биде подобар скрининг маркер за раниот HCC.46 Во проспективна студија на 47 течни биопсии кои ги тестираа cfDNA и протеините кај популацијата на населението, се покажа дека тие се ефикасни во разликувањето на пациентите со HCC од пациентите без HCC.Во следење на 331 ултразвучни нормални и AFP-негативни пациенти, чувствителноста и специфичноста на cfDNA за дијагностицирање на HCC беа 100% и 94%, соодветно, така што cDNA можеше да открие HCC кај асимптоматски HBsAg серопозитивни индивидуи.Во студијата Yeo48, беше пронајдена висока фреквенција (92,5%) на хиперметилација на промоторот RASSF1A кај пациенти со HCC.Покрај тоа, Ксу и сор.создаде дијагностички модел за предвидување на HCC со користење на панел од специфични маркери за метилација со специфичност и чувствителност од 90,5% и 83,3%, соодветно.Панелот им овозможува на пациентите со HCC да се разликуваат од пациентите со други заболувања на црниот дроб, што е подобро од AFP.Тие, исто така, откриле дека нормалните контроли кои биле позитивни на тестот може да имаат фактори на ризик за HCC, како што е ХБВ инфекција или историја на употреба на алкохол.25 Претпоставуваме дека факторите со висок ризик за HCC може да промовираат хиперметилација на cfDNA, што потоа придонесува за прогресијата на HCC, а со тоа и cfDNA може да игра клучна улога во скринингот за групи со висок ризик.Каи и сор.го сумира целиот опсег на мутации на ctDNA и нуди силна стратегија за проценка на оптоварувањето на туморот кај пациентите.49 Оваа стратегија може да ја идентификува туморигенезата средна од 4,6 месеци пред промената на сликата и покажа супериорни дијагностички перформанси во споредба со серумските биомаркери AFP, AFP-L3 и PIVKA-II.Дијагностичката вредност на cDNA тестирањето е докажана кога евалуацијата на сликата не е достапна, така што тестирањето на cDNA е од вредност во дијагнозата на рана HCC кај високоризичните групи.Неодамна, научниците користеа NGS технологија за да ги анализираат индикаторите за мултиваријантна генетска варијација (вклучувајќи 5-хидроксиметилцитозин, 5'-мотив, фрагментација, нуклеозомска трага, HIFI) во 3204 клинички примероци и cfDNA.50 Повторно потврдени модели на HIFI со три независни сетови за возови, тестови и тестови покажаа стабилна и сигурна дискриминација помеѓу популациите HCC и не-HCC со чувствителност од 95,79% и 95,42% во сетови за тестирање и тестови специфични за HCC, соодветно.Половите биле 95,00% и 97,83%, соодветно.Дијагностичката вредност на методот HIFI е повисока од онаа на AFP во разликувањето на HCC од цироза.Покрај тоа, ctDNA се користи и во хируршки третман.Ацуши и сор.ги утврди предоперативните серумски нивоа на ctDNA кај пациенти со HCC и откри дека стапката на повторување и стапката на екстрахепатални метастази во cDNA позитивната група беа значително повисоки отколку во групата со негативна cDNA, а нивоата на cDNA беа значително корелирани.со прогресија на туморот.51 Бидејќи е високо чувствителен биомаркер, ctDNA може да ја предвиди способноста на HCC да ги нападне садовите.Ванг и сор.изведено секвенционирање на целиот геном на 46 пациенти со HCC, а мултиваријатната анализа покажа дека прагот на алелската фреквенција на варијантата на cDNA за инвазија во микросадите е 0,83%, чувствителноста 89,7% и специфичноста 80,0%.независен фактор на ризик за микроваскуларна инвазија во HCC што може да се ресектира, што сугерира дека cDNA може да помогне во оптималниот третман.Како заклучок, ctDNA е целосно вмешана во појавата и развојот на HCC и може да се користи за ран скрининг, хируршка евалуација и следење на болеста.
CTC се малигни клетки добиени од примарни тумори или метастази кои метастазираат во крвотокот.Туморските клетки лачат матрикс металопротеинази (MMPs), кои ја разградуваат базалната мембрана, дозволувајќи им на клетките на туморот директно да навлезат во крвта и лимфните садови.Сепак, повеќето CTCs брзо се елиминираат со аноики, имунолошки напад или стрес на смолкнување.53 Епително-мезенхималната транзиција (ЕМТ) им овозможува на CTC лесно да се изолираат од примарното туморско ткиво, да ги нападнат капиларите и да стекнат значително подобрено преживување, метастази, инвазивност и отпорност на лекови.Студиите покажаа дека постои длабока хетерогеност меѓу различните туморски клетки во примарните метастатски тумори.Така, CTC анализата може да доведе до сеопфатно разбирање на хетерогеноста на туморските клетки.54
Специфичните маркери за CTC поврзани со HCC вклучуваат глипикан-3 (GPC3), азијалогликопротеински рецептор (ASGPR), молекула за адхезија на епителните клетки (EpCAM) и маркери поврзани со матични клетки како што се CD44, CD90, 55 и меѓуклеточна адхезија (ICAM1).) .56 GPC3 маркерот е протеин закотвен на клеточната мембрана кој клинички се користи за патолошка анализа и карактеризација на HCC.57 Изразувањето на GPC3 е почеста кај HCC туморските клетки со средна и ниска диференцијација и промовира екстрахепатална миграција;дополнително, присуството на GPC3+ CTC укажува на метастатски HCC.58 ASGPR е трансмембрански протеин изразен само на површината на хепатоцитите и е високо изразен во добро диференциран HCC.EpCAM е еден од најчесто користените мембрански поврзани протеини за фаќање на CTC.EpCAM е идентификуван како површински маркер на HCC клетки со карактеристики на матични клетки,59 што е во корелација со различни клиникопатолошки карактеристики на HCC, како што се васкуларна инвазија, проценети нивоа на AFP и напредна фаза на рак на црниот дроб во болницата во Барселона (BCLC).Фенотипот 60 CTC EMT е многу метастазиран.54 ЕМТ процесите во CTC промовираат HCC метастаза.Изразувањето на ЕМТ маркерите како што се виментин, вист, врзување со цинк со прст на Е-кутија (ZEB) 1, ZEB2, полжав, голтка и Е-кадерин се проучувани кај CTC добиени од црниот дроб од пациенти со HCC.58 Системот CanPatrol™ развиен од Ченг [61] ги класифицира CTC во три фенотипски подгрупи врз основа на доминантно изразени маркери: епителен фенотип (EpCAM, CK8/18/19), мезенхимален фенотип (виментин, намотан) и мешани фенотипови.Кај 176 пациенти, вкупниот CTC беше супериорен во однос на AFP во диференцирањето на HCC од бенигно заболување на црниот дроб.Вредностите на AUC за вкупниот CTC, AFP и комбинираниот вкупен CTC и AFP беа 0,774 (95% CI, 0,704-0,834), 0,669 (95% CI, 0,587-0,750) и 0,821 (95% CI, 0,704-0,834), и 0,821 (95% CI, 56-0,7. ).), соодветно.Класификацијата на CTC врз основа на ЕМТ може да предвиди HCC дијагноза, рано повторување, метастази и пократко целокупно време.
Во моментов, методите за откривање на CSC вклучуваат физички методи и биолошки методи.Физичките методи, честопати наречени збогатување засновани на биофизички својства, главно зависат од физичките својства на CSC, како што се големината, густината, полнежот, мобилноста и деформабилноста.Во зависност од физичките својства, постојат различни методи како што се системи засновани на филтрација, диелектрофореза итн. Вториот, исто така познат како збогатување базирано на имуноафинитет, главно се базира на врзување антиген-антитела бидејќи методот користи антитела против биомаркери специфични за туморот. како што се EpCAM, ASGPR, рецептор 2 за човечки епидермален фактор на раст (HER2), специфичен антиген на простата (PSA), хуман панцитокератин (P-CK) и карбамоил фосфат синтаза 1 (CPS1).62 Друг тип, наречен метод без збогатување, користи цитометрија на проток за да ги диференцира CTC од леукоцитите врз основа на повисокиот однос и големина меѓу нуклеарните и цитоплазматските.Во моментов, единствениот тест одобрен од FDA за откривање на CTC е системот Cell-Search™, кој користи маркер за клеточна површина EpCAM. Сепак, комбинираното откривање на CTC базирано на маркери може да ја зголеми стапката на позитивност.54 Мешавина од антитела против ASGPR и CPS1 постигна стапка на CTC детекција од 91% кај пациенти со HCC.63 Zhang et al користеа CTC-чип со антитела против ASGPR, P. -CK и CPS1, и диференцирани HCC пациенти од оние со бенигно заболување на црниот дроб или не-HCC карцином со стапка од 100%.64 Студијата на Wang открила EpCAM+ CTCs кај 60% од 42 HCC пациенти и открила значајни корелации помеѓу двете позитивни стапката и бројот на CTC со TNM стадиум.65 Guo et al откриле дека PCR резултатот добиен од CTC бил покачен кај 125/171 (73%) пациенти чие ниво на AFP било <20 ng/mL со чувствителност од 72,5% и специфичност од 95,0%, во споредба со 57,0% и 90,0% за AFP при прекин од 20 ng/mL.66 Комбинацијата на AFP и CTC може да го подобри откривањето на HCC.45 Се верува дека CTC имаат предност во однос на AFP во раниот скрининг на групите со висок ризик за HCC. Сепак, комбинираното откривање на CTC базирано на маркери може да ја зголеми стапката на позитивност.54 Мешавина од антитела против ASGPR и CPS1 постигна стапка на CTC детекција од 91% кај пациенти со HCC.63 Zhang et al користеа CTC-чип со антитела против ASGPR, P. -CK и CPS1, и диференцирани HCC пациенти од оние со бенигно заболување на црниот дроб или не-HCC карцином со стапка од 100%.64 Студијата на Wang открила EpCAM+ CTCs кај 60% од 42 HCC пациенти и открила значајни корелации помеѓу двете позитивни стапката и бројот на CTC со TNM стадиум.65 Guo et al откриле дека PCR резултатот добиен од CTC бил покачен кај 125/171 (73%) пациенти чие ниво на AFP било <20 ng/mL со чувствителност од 72,5% и специфичност од 95,0%, во споредба со 57,0% и 90,0% за AFP при прекин од 20 ng/mL.66 Комбинацијата на AFP и CTC може да го подобри откривањето на HCC.45 Се верува дека CTC имаат предност во однос на AFP во раниот скрининг на групите со висок ризик за HCC.Сепак, комбинираното откривање на CTC засновано на маркер може да го зголеми процентот на позитивни резултати.54 Мешавина од анти-ASGPR и CPS1 антитела постигна стапка на CTC детекција од 91% кај пациенти со HCC.63 Zhang et al.користеше CTC-Chip со антитела против ASGPR, P-CK и CPS1, а исто така ги разликуваше пациентите со HCC од оние со бенигно заболување на црниот дроб или не-HCC со стапка од 100%.частота и количеството ЦОК со стадией TNM.65 Гуо и соавторы обнаружили, што показатель ПЦР, полученный из ЦОК, был повышен у 125/171 (73%) пациентов, у которых чувствитель 7/2% и специфичноста 95,0% по сравнению со 57,0% и 90,0% за АФП при пороговом уровне 20 нг/мл. групп. фреквенција и број на CTC со TNM стадиум.65 Guo et al откриле дека PCR изведен од CTC е покачен кај 125/171 (73%) пациенти кои имале нивоа на AFP <20 ng/mL со чувствителност од 72,5% и специфичност на 95,0% во споредба со 57,0% и 90,0% за AFP на ниво на исклучување од 20 ng/mL.66 Комбинацијата на AFP и CTC може да го подобри откривањето на HCC.45 CTC се смета дека имаат предност во однос на AFP при раниот скрининг групи.со висок ризик од HCC.Сепак, комбинираното откривање на CTC врз основа на маркери може да го зголеми процентот на позитивни резултати.54 Мешавина од анти-ASGPR и CPS1 антитела постигна 91% стапка на откривање на CTC кај пациенти со HCC.63 Жанг и сор.користел CTC чипови со антитела против ASGPR, P-CK и CPS1 и ги издвоил пациентите со HCC од бенигни заболувања на црниот дроб и не-HCC со 100%.64 Студијата на Ванг идентификуваше 60% од EpCAM+ CTC кај 42 пациенти со HCC и откри значајна корелација помеѓу инциденцата и бројот на CTC во фазата на TNM. 65 Guo 等 人 发现 ， 在 AFP 水平 <20 ng/ml 的 125/171 (73%) 名 患者 中 ， CTC 衍生 的 PCR 评分 升高 ， 敏感性 为 72,5%， 特异性 为 95,0%， 而 AFP 在值为20 ng/mL 时的特异性为57,0% 和90,0%. 65 Guo 等 人 发现 在 在 在 水平 <20 ng/ml 的 125/171 (73%) 名 患者 ， ， CTC 衍生 PCR 评分 ， 敏感性 为 为 72,5%， 为 95.0%， AFP 在 截止 截止 截止 截止 截止 截止截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 为 为 20ng/ml 时 的 为 57,0% 和 90,0%。65 Гуо и сор.обнаружили, што у 125/171 (73%) пациентови со уровнем АФП <20 нг/мл показатели ПЦР, полученные со помош на ЦОК, были повышены со чувствительностью 72,5% на уверенетост, а увпецие и специфичност; отсечки Специфичность составляла 20 нг/мл. покажа дека кај 125/171 (73%) пациенти со нивоа на AFP <20 ng/mL, вредностите на PCR добиени од CTC беа покачени со чувствителност од 72,5% и специфичност од 95,0%, додека AFP беше на гранична специфичност беше 20 ng/mL.ml изнесуваше 57,0% и 90,0%.66 Комбинацијата на ORP и CTC го подобрува откривањето на HCC.Се смета дека 45 CTC се супериорни во однос на AFP при раниот скрининг на високоризичните HCC популации.Така, за CTC-позитивни и високоризични HCC групи, CTC тестирањето треба рутински да се комбинира со ултразвук и AFP детекција.Сепак, CTC се сметаат за важни предиктори за туморски метастази и рецидиви, а откривањето на CTC не се препорачува независно како дијагностичка алатка.62 Затоа, CTC може да послужи како подобар предвидувачки биомаркер од другите моментално користени маркери. Џоу и соработниците откриле дека пациентите со покачен број на EpCAM+ CTC и регулаторни Т-клетки покажале поголем ризик за развој на повторување на HCC, отколку оние со низок број на CTC, со сооднос на повторување од 66,7% наспроти 10,3% (P <0,001).67 Слична студија беше пријавена од Zhong et al.68 Покрај тоа, Qi откри дека 101 од 112 пациенти (90,81%) со HCC, вклучувајќи ги и оние со рана фаза на болеста, биле позитивни за CTCs и дека многу мали HCC јазли биле откриени по 3 до 5 месеци следење. Џоу и сор откриле дека пациентите со покачен број на EpCAM+ CTC и регулаторни Т-клетки покажале поголем ризик за развој на повторување на HCC од оние со низок број на CTC, со сооднос на повторување од 66,7% наспроти 10,3% (P <0,001).67 A слична студија беше пријавена од Zhong et al.68 Покрај тоа, Qi откри дека 101 од 112 пациенти (90,81%) со HCC, вклучувајќи ги и оние со рана фаза на болеста, биле позитивни за CTCs и дека многу мали HCC јазли биле откриени по 3 до 5 месеци следење. Чжоу и др.обнаружили, што у пациентов со повышенным количеством ЦОК EpCAM+ и регулаторни Т-клеток ризик развития рецидива ГЦК был повеќе, колку од пациентов со ниско количество ЦОК, со помала количина од 60,7% (10,60,7%) Zhou et al откриле дека пациентите со покачени EpCAM+ CTC и регулаторни Т-клетки имале поголем ризик од повторување на HCC од оние со низок CTC, со стапка на повторување од 66,7% наспроти 10,3% (P<0,001)67.Слична студија беше спроведена од Zhong et al.68. Дополнително, Чи откри дека 101 од 112 пациенти (90,81%) со HCC, вклучувајќи ги и оние со рана болест, имале CTC, и дека многу мали HCC јазли биле откриени по 3 до 5 месеци следење. Zhou 等 人 发现 ， 与 ctc 数量 较 少 的 相比 ， ， epcam+ ctc 和 调节性 t 细胞 数量 的 患者 发生 发生 hcc 复发 的 风险 更 ， 分别 为 为 66,7% 和 10,3% (p <0.001)。 Zhou 等 人 发现 与 与 ctc 数量 少 的 相比 ， epcam+ ctc 和 t 细胞 数量 患者 发生 发生 hcc 复发 风险 更 ， 分别 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 10,3% ( стр <0,001) ........ Чжоу и др.обнаружили, что пациенты со повышенным количеством ЦОК EpCAM+ и регулаторных Т-клеток имели более высокий ризик рецидива ГЦК по сравнению со пациентами со меньшим количество со меньшим количество со меньшим количество со меньшим количество со меньшим количество со меньшим количество со миньшим количество со 1,7% од ЦОК. Џоу и сор.откриле дека пациентите со покачени EpCAM+ CTC и регулаторни Т-клетки имале поголем ризик од повторување на HCC во споредба со пациентите со помалку CTCs, со стапки на повторување од 66,7% и 10,3%, соодветно (P <0,001).Слична студија беше пријавена од Zhong et al.68 Дополнително, Чи откри дека 101 од 112 пациенти со HCC (90,81%), вклучително и пациенти со рана болест, имале позитивни CTC резултати и откриле многу мали HCC јазли по 3 посети.Набљудување до 5 месеци.Тие исто така откриле CTC кај 12 пациенти со хронична HBV инфекција и откриле мали HCC тумори во рок од 5 месеци кај 2 CTC-позитивни пациенти.69 Така, CTC може да се користат за предвидување на HCC, 70 но тие можат да се користат порутински како предвидувачки биомаркери.
Како cfDNA, cfRNA се ослободува во крвотокот преку различни системи.Овие молекули во периферната крв го претставуваат канцерогеното ткиво на потекло.Во споредба со маркерите откриени со неинвазивни методи, cfRNA се подинамично регулирани, специфични за ткивото и изобилни во екстрацелуларната средина.Значењето и дијагностичката вредност на 71 miRNAs (miRNAs) во HCC е пријавена во многу студии.miRNAs се ендогени некодирачки РНК (ncRNAs) кои регулираат различни молекуларни биолошки активности со инхибиција на транслацијата на целните гласници РНК (mRNAs).miRNAs се наоѓаат во апоптотични тела инкапсулирани во егзозоми, но тие исто така можат стабилно да се врзат за серумските протеини и липидите во периферната крв и може да се користат за проценка на HCC.микроРНК се вклучени во регенерацијата на црниот дроб, метаболизмот на липидите, апоптозата, воспалението и развојот на HCC.72 Онкогените miRNA како што се miR-21, miR-155 и miR-221 се добро познати во HCC.Особено, miR-21 игра клучна улога во синтезата на колаген во екстрацелуларниот матрикс и фиброзата и ја промовира хепатокарциногенезата преку активирање на хематопоетските матични клетки.72,73 Туморските супресорни miRNA во HCC вклучуваат miRNA-122, miRNA-29, семејството Let-7 и семејството miRNA-15.Семејството Let-7 се состои од многу туморски супресори miRNA кои го таргетираат семејството RAS.Семејството miR-15 вклучува miR-15a, miR-15b, miR-16, miR-195 и miR-497, кои имаат комплементарни секвенци за одредени mRNA.Дополнително, долгите некодирачки РНК (lncRNAs) и кружните РНК (cirRNAs) се исто така важни за раниот скрининг на HCC.lncRNAs претставуваат најширока класа на ncRNAs, вклучувајќи ги и ncRNA слични на mRNA, и се вклучени во патогенезата на многу човечки болести.LncRNAs играат регулаторна улога во микросредината на црниот дроб и хронично заболување на црниот дроб.74 CircRNAs се исто така класа на ncRNA со повеќе функции во регулирањето на генската експресија.Неодамна, circRNAs се сметаа како дијагностички алатки за HCC.
Циркулирачката слободна РНК има извонредна стабилност, вклучувајќи отпорност на температура, pH и RNase, што ја прави изолацијата на fnRNA од периферната крв помалку мачна со користење на стандардни методи за прочистување на РНК.Најчесто користените методи вклучуваат NGS, микросреди и RT-qPCR.NGS овозможува микроРНК да се мерат низ целиот геном.Сепак, овој метод е скап и анализата не е стандардизирана.Спротивно на тоа, RT-qPCR е ефтин, брзо ги засилува нуклеинските киселини и нуди многу предности како што се поголема чувствителност, поголема прецизност, поширок динамички опсег и потреба од помалку примероци.Микросредите се друг метод што се користи за откривање на miRNA врз основа на чувствителна и специфична хибридизација на целните miRNA со комплементарни ДНК сонди, 75 но анализата на податоците од микросредите одзема многу време.
Забележано е дека циркулирачките miR-122 и Let-7 се потенцијално корисни за дијагностицирање на HCC во рана фаза кај високоризични групи, маркери кај пациенти со премалигни јазли асоцирани со HBV и HCC во рана фаза.76 Cai et al.откриле дека членовите на семејството Let-7 (miR-92, miR-122, miR-125b, miR-143, miR-192, miR-16, miR-126 и miR-199a/b) се изложени на ризик од хронична HCC кај пациенти со хепатитис.Семејството Let-7 може да послужи како ефикасен сурогат биомаркер за предвидување на развојот на HCC кај високоризичните групи поврзани со хроничен хепатитис Ц. 77 miR-122 има висока дијагностичка точност во откривањето на рано HCC кај пациенти со цироза на црниот дроб.78 Серумот што циркулира MiR-107, исто така, е евалуиран во раните фази на HCC, 79 и покажа добар потенцијал кај популациите со висок ризик.Zhou et al објавија дека панел од miRNAs (miR-122, miR-192, miR-21, miR-223, miR-26a, miR-27a и miR-801) може да го разликува HCC од хроничен хепатитис Б (CHB) и цироза чувствителноста беше 79,1% и 75%, а специфичноста 76,4% и 91,1%, соодветно.80 Во HCC поврзана со HBV, откривме дека нивоата на miR150 беа значително намалени во споредба со оние кај хроничните HBV пациенти без HCC (чувствителност 79,1%, специфичност 76,5%).-224 беше покачен кај HCC во споредба со здравите контроли, а анализите на подгрупите покажаа повисоки нивоа кај пациенти со HCC поврзани со HBV.Пациентите со цироза поврзана со хепатитис Б и HCC идентификуваа класификатор на siRNA што содржи седум диференцијално изразени siRNA кои можат да детектираат HCC во различни контроли;Опсегот на AUC при раниот скрининг е подобар од волонтерите на АФП.Тие открија дека четири miRNA (miR-1972, miR-193a-5p, miR-214-3p и miR-365a-3p) може да разликуваат пациенти со HCC од пациенти без HCC.Пет преекспресирани miRNAs (miR-122-5p, miR-125b-5p, miR-885-5p, miR-100-5p и miR-148a-3p) се сметаат за потенцијални HBV инфекции кај HCC, цироза и CHB биомаркери, особено miR-34a-5p може да биде биомаркери за цироза на црниот дроб,85 и може да биде потенцијален биомаркер за ран скрининг на HCC кај високоризичните популации.Најпроучуваната lncRNA во HCC е високо активирана кај рак на црниот дроб (HULC).Други студии покажаа дека HULC што циркулира кај пациенти со HCC може да се користи како дијагностички маркер бидејќи оваа lncRNA е високо регулирана кај пациенти со HCC во споредба со здравите индивидуи.71,86 Меѓу другите lnRNA, LINC00152 се смета за најдобра дијагностичка lncRNA поради неговата висока AUC, чувствителност и специфичност.86 Во една студија, периферната крвна експресија на LINC00152 постепено се зголемуваше од нормални здрави контроли до пациенти со CHB и цироза, и конечно беше највисока кај HCC.Студиите за експресијата на circSMARCA5 во плазмата на пациенти со HCC покажаа прогресивен пад на експресијата на HCC, во опсег од хепатитис до цироза и преканцерозни лезии.87.Дополнително, Жу анализирал 13.617 циклични РНК во примероци од плазма од пациенти со HCC поврзани со HBV и потврдил дека 6 циклични РНК се изразени различно во HCC и HBV-асоцираната цироза, што сугерира дека cRNAs може да бидат корисни.маркери за ран скрининг на високоризични групи како што се оние поврзани со заболување на црниот дроб, пациенти со склероза.88
Егзозомите се мембрански везикули со дијаметар од 40-160 nm;повеќе интрацелуларни везикули се спојуваат со клеточната мембрана и се ослободуваат во екстрацелуларната матрица.Тие содржат многу активни компоненти, вклучувајќи липиди, протеини, РНК и ДНК и играат клучна улога во комуникацијата помеѓу клетките, и HCC и не-HCC клетките.89,90 Егзозомите ја регулираат прогресијата на HCC преку активирање на хепатоцитните фибробласти и ѕвездените клетки, имунолошките клетки, нормалните хепатоцити и HCC клетките.91 Во микросредината на туморот, туморските клетки произведуваат голем број на егзозоми кои се носат од клетките на ракот до незрели клетки, кои пак се вклучени во онкогенезата, деградацијата и клеточната сигнализација.92 Студиите покажаа дека егзосомите можат да пренесат онкогени во нормалните клетки за време на патолошки процеси, што може да биде еден од механизмите на туморска инвазија и метастазирање.93 Улогата на егзосомите во прогресијата на ракот може да биде динамична и специфична за типот на рак, 89 Егзозомите може да се интернализираат од соседните или оддалечените клетки за да регулираат повеќе целни гени во клетките примачи кои можат да бидат вклучени во меѓуклеточните комуникациски јони и интеракциите на клеточната микросредина. посредува во клеточната сигнализација и метаболизмот.94 Карактеристиките и динамичките промени на товарните молекули на егзосомите директно ги рефлектираат карактеристиките и динамичките промени на родителските туморски клетки,95 што исто така е основа за употребата на егзосомите во дијагнозата и прогнозата на ракот, како и за предвидување индивидуален одговор на антиканцерогена терапија ..96
Традиционалните лабораториски методи за изолирање и анализа на егзосомите се сложени, повеќестепени и одземаат многу време, вклучувајќи ултрацентрифугирање, филтрација, хроматографија со исклучување на големината, прочистување на имуноафинитетот, вестерн blotting, ензимски поврзана имуносорбентна анализа (ELISA), PCR анализа и проток.минијатуризирани системи и платформи за лабораторија на чип кои користат микро/нанотехнологија се широко развиени за брза, удобна in situ изолација на егзосомите.Анализата за следење на наночестички (NTA) е широко користен метод за карактеризирање на големината и концентрацијата на егзосомите, вклучувајќи методи како што се магнетни наночестички и полихидроксиалканоати.Микрофлуидните и електрохемиските методи, исто така, можат брзо да детектираат егзозоми со високи приноси.
Егзозомалните протеини се важни маркери за дијагноза на HCC.Во студијата Arbelaiz, нивото на 98 RasGAP SH3 врзувачки протеин (G3BP) и полимерен имуноглобулински рецептор (PIGR) беше значително покачено во егзосомите добиени од HCC, а наводната комбинирана ефикасност на двата протеини беше подобра од онаа на AFP.Преоптоварувањето со железо е важен фактор кој придонесува за развојот на HCC.Ценг објави дека хепцидин може да игра клучна улога во отпорноста на HCC.99 Егзозомите добиени од серумот на пациенти со HCC имаа значително поголем број на копии на варијанти на mRNA на хепцидин од нивните здрави колеги, што сугерира дека хепцидин може да биде нов дијагностички биомаркер за HCC.14-3-3ζ протеинот во егзосомите произведени од 100 HCC може да ја намали активацијата, пролиферацијата и диференцијацијата на Т-клетките и може да предизвика трансформација на Т-клетките во регулаторни Т-клетки, што резултира со исцрпување на Т-клетките.101 Ова е поддржано од неколку студии кои ја истражуваат евазијата на туморот од имунолошкиот надзор, 102 што може да придонесе за туморигенезата на HCC.
Покрај присуството на ecRNA во плазмата или серумот, егзосомите збогатени со РНК може да се користат за неинвазивно поставување во реално време во раниот скрининг на туморот и за одредување на еволуцијата на туморот и одговорот на терапијата.Нивото на егзосомна miRNA-21 во крвниот серум во групата HCC беше 2,21 пати повисоко отколку во групата CHB, а во групата HCC беше 5,57 пати повисоко отколку кај здравата популација.Во студијата на Ванг, егзосомите значително го зголемија HCC во споредба со пациенти со цироза со вредности на AUC од 0,83 (95% CI 0,74-0,93) и 0,94 (95% CI 0,88-1,00).104 Добиените податоци ја разјаснија вклученоста на специфични егзосомски карго молекули во регулирањето на онкогенезата и прогресијата на HCC.105 Серумската експресија на miR-221, miR-103, miR-181c, miR-181a, miR-93 и miR-26a е конзистентна.и метастазите, а нивоата на miR21 беа многу повисоки кај пациенти со HCC отколку кај здрави контроли, а исто така и кај пациенти со CHB.102 LncRNA имаше потенцијална дијагностичка вредност кај HCC.Студиите покажаа дека егзосомите добиени од серумот на пациенти со HCC имаат значително повисоки нивоа на LINC00161, LINC000635 и lncRNA активирани со трансформирање на факторот на раст-β отколку кај пациенти без HCC, а овие lncRNA се силно поврзани со фазата на TNM и волуменот на туморот.110 Conigliaro et al.Откриено е дека CD90+ егзосомите изразуваат високи нивоа на lncRNAH19, што значително го зголемува ослободувањето на васкуларниот ендотелен фактор на раст (VEGF) и производството на рецепторот VEGF-R1, а со тоа ја стимулира ангиогенезата.93 CircRNAs се друг вид на егзозомски ncRNAs – изразени на пониски, но стабилни нивоа кај видовите, circRNAs исто така покажуваат специфичност за типот на клетката, типот на ткивото, фазата на развој и регулаторната активност.111 circRNA се дијагностички биомаркери за ран и минимално инвазивен карцином.112 Неодамнешните клинички испитувања покажаа дека специфичноста на поединечните miRNAs во предвидувањето на HCC не е идеална.Затоа, комплексното откривање со користење на повеќе анализи (на пример, miR-122 и miR-48a во комбинација со AFP) може да ја подобри идентификацијата на раната HCC и диференцијацијата на HCC од цироза.100
Пациентите со CHB и цироза на црниот дроб се најчестата група со висок ризик за развој на HCC.За групите со висок ризик, штом ќе се постигне одржлив вирусолошки одговор, треба да се развие рентабилна стратегија за надзор базирана на ризикот од HCC, а раниот скрининг е клучот за подобрување на дијагнозата и третманот на HCC со висок коефициент на исплатливост2 ..Раните методи на скрининг за рак имаат многу ограничувања: ефективни методи за ран скрининг не се развиени за повеќето видови на рак, а придржувањето е обично ниско.Во споредба со традиционалните методи за ран скрининг, технологијата за течна биопсија има очигледни предности: леснотија на земање примероци, откривање на панрак, добра репродуктивност на примерокот и ефективен одговор на хетерогеноста на туморот.Со оглед на исплатливоста на методите поврзани со течна биопсија, нивната употреба при скрининг на HCC не е рутински тестирана.И покрај напредокот во прецизното откривање на молекуларно ниво, течната биопсија е скапа за откривање на HCC кај целните пациенти, ограничувајќи ја нејзината широка употреба во споредба со специфичните процедури за снимање, како што се ултразвук и магнетна резонанца.113.114 Сепак, една претходна студија покажа дека течната биопсија покажала значителна корист во однос на квалитетно прилагодените животни години (QALYs).115 Придобивките од течната биопсија кај раниот карцином на желудникот и назофаринксот исто така се прикажани.116.117 Сегашното гледиште е дека течната биопсија може да ги надополни серумските биомаркери и радиолошкиот скрининг при откривање и дијагноза на тумори.117 118
Според сегашната литература, технологијата за биопсија на течност покажа значително поголема чувствителност и специфичност во раниот скрининг на високоризичните групи за рак на црниот дроб.Без оглед на типот на течна биопсија, таа може да разликува HCC од високоризични лица без HCC, што укажува на важноста на раниот скрининг бидејќи разликите помеѓу високоризичните и здравите индивидуи се очигледни.ctDNA има краток полуживот и може да се користи за откривање на HCC, така што секоја промена во cDNA добиена од тумор може да обезбеди во реално време конкретни докази за прогресијата на туморот, особено за мали тумори.Високото ниво на ctDNA укажува на развој и ширење на ракот и е ран показател за прогресија и повторување.Дополнително, врз основа на резултатите од ctDNA, пациентите можат да добијат индивидуализиран третман и следење.119 Специфичните места за метилација може да бидат подобар маркер од AFP за рана идентификација на HCC и цирозни нодули.Во ресектабилните случаи на HCC, високите нивоа на cDNA се индикативни за микроваскуларна инвазија и постоперативно повторување и метастази.Промените во бројот на копии се поврзани со преживувањето на пациентите со HCC.Може да се претпостави дека евалуацијата на cDNA може да биде вклучена во целокупниот третман на HCC, а cDNA може да послужи како ефективен индикатор за терапевтска модулација.Маркери базирани на специфични генетски мутации во ctDNA се усвоени со клинички упатства за да се предвиди ефикасноста и да се следи отпорноста на лекот.ctDNA тестирањето може да биде најкорисната алатка за течна биопсија за ран скрининг.CTCs исто така играат клучна улога во раниот скрининг на високоризичните HCC групи.Различни маркери на CTC поврзани со HCC се од особено значење во почетокот, развојот и повторувањето на HCC.Како мембрански везикули, егзосомите се вклучени во меѓуклеточните комуникации, особено во HCC клетките.Циркулирачките микроРНК се стабилни во крвта и затоа може да бидат покорисни за ран скрининг на HCC.Постепено, беа откриени егзозомски протеини и егзозоми богати со РНК и беше потврдена нивната предиктивна ефикасност за HCC.Интересно е тоа што различните етиологии на HCC може исто така да бидат поврзани со различни мутации, така што можеме да избереме различни биомаркери за ран скрининг врз основа на различни етиологии на HCC.120
Сепак, сегашните техники на биопсија на течност се сомнителни во однос на стабилноста и не можат самостојно да вршат ран скрининг или мониторинг на HCC, но сепак можат да го надополнат индивидуалниот скрининг и дијагноза.121.Сепак, точниот механизам на ослободување на ctDNA во крвта останува да се разјасни.Откривањето на основните биолошки својства на ctDNA може да ја олесни неговата употреба како маркер.Малата количина на ctDNA во циркулацијата и строгите барања за ракување со примерокот се предизвици за клиничката имплементација на откривање на cDNA во HCC.Покрај тоа, генетските мутации немаат специфични карактеристики кои овозможуваат точна идентификација на канцерогени.Бидејќи повеќе генетски и соматски варијанти се присутни и во нормалните ткива, генетските мутации идентификувани со течна биопсија може да бидат од ограничена корист при раниот скрининг за HCC.122 Ограничувањата на добро дефинираните корисни генски цели и биомаркери кои помагаат да се диференцира cDNA од нетуморска ДНК се најважните прашања во употребата на cDNA.недостаток на корисност на чувствителни и специфични маркери за откривање на CTC.Беа пронајдени само одржливи клетки со метастатски потенцијал, а оптималната комбинација на маркери збогатени со CSC беше нејасна.Изолацијата на CTC за култура и евалуација на нивните мутациски профили е исто така предизвикувачка задача.Поради проблеми со идентификацијата, изолацијата и прочистувањето на егзосомите, специфичниот молекуларен механизам сè уште е нејасен, а претходните студии за механизмот на егзосомите и HCC не беа длабински и начинот на кој miRNA, lncRNA и протеини се сортираат во егзозоми , и не е јасно дали навлегувањето на егзозомите е процес од специфичен тип.Употребата на егзозоми за дијагноза и третман на HCC е сè уште во претклиничка фаза.Недостатокот на стандардизација на процедурите за течна биопсија, како што е типот на цевки што се користат за собирање крв, волумен на крв, складирање и откривање примероци, изолација и збогатување, може да ја оневозможи нивната употреба во рутинската клиничка пракса поради разликите во практиките низ медицинските центри.Ефикасноста на течната биопсија во раниот скрининг, дијагнозата, евалуацијата на ефикасноста и предвидувањето на HCC останува да се истражи, особено за групите со висок ризик.Технологијата за течна биопсија има голем потенцијал и се очекува да биде широко користена во клиничката пракса на рак на црниот дроб во блиска иднина.
1. Sung H., Furley J., Siegel RL et al.Глобална статистика за рак 2020: ГЛОБОКАН ја проценува инциденцата и смртноста од 36 видови на рак во 185 земји.Канцер Џ.Клин.2021; 71 (3): 209-249.doi: 10.3322/caac.21660
2. Седиште на Националната здравствена комисија.Критериуми за дијагноза и третман на примарен рак на црниот дроб (издание 2022) [J].Весник за клинички заболувања на црниот дроб, 2022 година, 38 (2): 288-303.doi: 10.3969/j.issn.1001-5256.2022.02.009
3. Џоу Ј, Сун Х, Ванг З и др.Упатства за дијагноза и третман на хепатоцелуларен карцином (издание 2019).Рак на црниот дроб.2020; 9 (6): 682-720.doi: 10.1159/000509424
4. Кокудо Н, Такемура Н, Хасегава К, и сор.Упатства за клиничка пракса за хепатоцелуларен карцином: Јапонско здружение за болести на црниот дроб, 2017 (JSH-HCC 4-ти упатства), ажурирање од 2019 година.Резервоар за заболување на црниот дроб.2019; 49 (10): 1109-1113.doi:10.1111/hepr.13411
5. Barrera-Saldana HA, Fernandez-Garza LE, Barrera-Barrera SA Течна биопсија кај хронично заболување на црниот дроб.Ен Хепато.2021; 20:100197.doi:10.1016/j.aohep.2020.03.008
6. Таи ТКЈу., Тан П.К.Течна биопсија на рак на дојка: фокусиран преглед.Arch Pathol Lab Med.2021; 145 (6): 678-686.doi: 10.5858/arpa.2019-0559-RA
7. Канвал Ф., Сингал АГ Надзор за хепатоцелуларен карцином: тековни најдобри практики и идни насоки.Гастроентерологија.2019; 157 (1): 54-64.doi:10.1053/j.gastro.2019.02.049
8. Европска асоцијација за истражување L, Европска организација R, C Therapeutics.Клинички упатства EASL-EORTC: третман на хепатоцелуларен карцином.Ј Хепарин.2012; 56 (4): 908-943.doi:10.1016/j.jhep.2011.12.001
9. Џанг Г., Ха СА, Ким ХК и сор.Комбинирана анализа на AFP и HCCR-1 како корисни серолошки маркери кај мал хепатоцелуларен карцином: проспективна кохортна студија.Дис Марк.2012; 32 (4): 265-271.doi: 10.3233/DMA-2011-0878
10. Чен С, Чен Х, Гао С, и сор.Диференцијална експресија на плазма microRNA-125b во заболување на црниот дроб поврзано со вирусот на хепатитис Б и дијагностички потенцијал на хепатоцелуларен карцином индуциран од вирусот на хепатитис Б.Резервоар за заболување на црниот дроб.2017; 47 (4): 312-320.doi:10.1111/hepr.12739
11. Halle PR, Foster F., Kudo M. et al.Биологија и значење на алфа-фетопротеин во хепатоцелуларен карцином.Црниот дроб инт.2019; 39 (12): 2214-2229.doi: 10.1111/liv.14223
12. Омата М, Ченг АЛ, Кокудо Н и сор.Клинички упатства за третман на хепатоцелуларен карцином во азиско-пацифичкиот регион: ажурирање од 2017 година.Меѓународна организација за заболувања на црниот дроб.2017; 11 (4): 317-370.doi: 10.1007/s12072-017-9799-9
13. Ксу Феи, Џанг Ли, Хе Веи и сор.Дијагностичка вредност на серумскиот PIVKA-II сам или во комбинација со AFP кај кинески пациенти со хепатоцелуларен карцином.Дис Марк.2021; 2021: 8868370.doi: 10.1155/2021/8868370
14. Дурин Л., Прарадинес А., Басет С. и сор.Неситноклеточен рак на белите дробови биопсија на неплазма хуморална течност: поблиску до туморот!ќелија.2020; 9 (11).doi: 10.3390/cells9112486
15. Mader S, Pantel K. Течна биопсија: моментален статус и идни перспективи.Третман Oncol Res.2017; 40 (7-8): 404-408.doi: 10.1159/000478018
16. Палмирота Р, Ловеро Д, Кафорио П, и сор.Течна биопсија на рак: мултимодална дијагностичка алатка во клиничката онкологија.Adv Med Oncol.2018;10:1758835918794630.doi: 10.1177/1758835918794630
17. Mandel P., Metais P. Нуклеински киселини во човечка плазма.CR Seances Soc Biol Fil.1948; 142 (3-4): 241-243.
18. Mouliere F, Chandrananda D, Piskorz AM, et al.Напредно откривање на циркулирачка туморска ДНК со анализа на големината на фрагментот.Науката ја преведува медицината.2018; 10:466.doi:10.1126/scitranslmed.aat4921
19. Underhill HR, Kitzman JO, Hellwig C. et al.Циркулирачка должина на фрагментот на ДНК на туморот.PLOS гени.2016; 12 (7): e1006162.doi:10.1371/journal.pgen.1006162
20. Cheng F, Su L, Qian C. Циркулирачка туморска ДНК: ветувачки биомаркер во биопсијата на рак базирана на течност.цел тумор.2016; 7 (30): 48832-48841.doi:10.18632/oncotarget.9453
21. Бетеговда С., Саузен М., Лири РЈ и сор.Откривање на циркулирачка туморска ДНК во раните и доцните фази на човечки малигни тумори.Науката ја преведува медицината.2014; 6 (224): 224ra24.doi:10.1126/scitranslmed.3007094
22. Mehes G. Течна биопсија за мутациона предвидувачка анализа на цврст карцином: перспектива на патолог.Ј Биотехнологија.2019; 297:66-70.doi: 10.1016/j.jbiotec.2019.04.002
[PubMed] 23. Ленартс Л, Тувери С, Јаценко Т, и сор.Рано откривање тумор со скрининг на циркулирачката плазма ДНК: возбуда или надеж?Белгиско клиничко право.2020 година;75 (1): 9-1 дои: 10.1080/17843286.2019.1671653
24. Nishida N. Ефект на вирусот на хепатитис и стареењето на метилацијата на ДНК во човечката хепатокарциногенеза.Хистопатологија.2010; 25 (5): 647-654.doi: 10.14670/HH-25.647